血液基因組 DNA 提取試劑盒（快速型）

Blood Genomic DNA Extraction Kit

（適合從 50-200 μl 血液中提取基因組 DNA） 

血液基因組 DNA 提取試劑盒（快速型）

試劑盒組成：50 (50 次)

儲存條件：本試劑盒在室溫（15-25 ℃）下可保存一年。

產(chǎn)品特點：

TM Blood Genomic DNA Extraction Kit 采用*的疏水膜技術(shù)，*去除全血中蛋白和大部分 RNA 等各種干擾物，提取高純度的 DNA。試劑盒采用*的緩沖統(tǒng)，適用于多種不同類型的血液，同樣適用于從新鮮或冷凍的血漿、血清和其它無細胞體液中提取病毒 DNA。

注意事項：

1.實驗前準備工作：詳細閱讀該手冊熟悉各步驟，并準備好所有的試劑盒組分、1.5 ml 和 2 ml 滅菌離心管、以及 37 ℃和 65 ℃的溫浴條件。

2.KBL1 和 KW1 在低溫時可能產(chǎn)生混濁或沉淀，在 37-65 ℃溫浴片刻即可。

3.Buffer KW *次使用前請按瓶上標簽加入 50 ml 無水或 95%乙醇， 并常溫保存。每次使用后，請立即擰緊蓋子。

操作步驟：

（一）平衡吸附柱

1.取一 KarrotenTM Mini Column 柱裝在一個 2 ml 收集管上（已備）。加入 300 μl Buffer KB 平衡液至柱子內(nèi)，室溫 13 000 rpm 離心 1 min，使平衡液*流過柱子。棄收集管中的濾液，將空柱套回收集管內(nèi)。

注意：柱子不平衡，將導致 DNA 產(chǎn)率減少。

（二）樣品處理

2.（1）按 100 μl 全血（適合各種抗凝劑，EDTA 較好）加入 100 μl 等體積的 KTL1，混勻，37℃溫浴 5min。

(2) 加入 1000 μl KBL1，混勻 1min。

注意： 取樣體積因物種不同有所差異。人血以 100-200 μl 為，小鼠以 50-100 μl 為。且當全血體積大于 200 μl 時，KBL1 體積按比例擴大。

（二）吸附

3.將混合液轉(zhuǎn)移至已平衡的吸附柱內(nèi)，室溫 13 000 rpm 離心 30 s，使裂解液*流過柱子。保留柱，棄去收集管中的過濾液，將柱重新放入收集管。

注意：如混合液體積過大，可分數(shù)次上柱，每次上樣量不要超過 700 μl。

4.（可選）加入 30 μl  濃度為 20-50 μg/ml 的RNase A  于柱的膜上，37 ℃放置 5-10 min。

注意：本試劑盒沒有配備 RNase A 溶液。一般來說，這一步?jīng)]有必要，因為本試劑盒的純化柱對 RNA 沒有吸附能力。如果實驗要求不能殘留微量RNA，可采用這一步處理。

(三) 漂洗

5.加入 700 μl Buffer KW1，室溫 13 000 rpm 離心 30 s，棄去收集管中的過濾液，保留柱。

6.加入 700 μl Buffer KW，室溫 13 000 rpm 以上離心 30 s，棄去收集管

中的過濾液，保留柱。

注意：Buffer KW 在*使用之前必須加入 50 ml 無水乙醇，并置于室溫下保存。

7.（可選） 重復(fù)用 700 μl 70%乙醇（室溫）洗滌柱子，室溫 12 000 rpm

離心 1 min。

8.棄收集管中的濾液，將空柱套回 2 ml 收集管內(nèi)。室溫下，高轉(zhuǎn)速或 13 000 rpm 離心 2 min 以甩干柱子基質(zhì)殘余的液體。

注意：此步驟不可省，否則將導致乙醇殘留于 DNA 中，影響后續(xù)反應(yīng)。

(四)洗脫

9.把柱子裝在一個新的 1.5 ml 離心管上，加入 30-50 μl 的 KE（可用滅菌的 TE 10 mM Tris-HCl，pH 8.0 或純水代替，純水可預(yù)先用 NaOH 調(diào) pH 值至 8.0）于膜的中央，65 ℃放置 5-10 min，13 000 rpm 以上離心 1 min 以洗脫 DNA。（也可以將 KE 預(yù)熱至 65℃，再加至膜上，可以減少放置時間至 1min）

注意：小心加 KE 到柱中吸附膜的中間部位，并確保液體將膜全部覆蓋。

10.DNA 可保存于 4 ℃，若長時間保存，可凍存于-20 ℃。

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診斷血清：沙門氏菌屬診斷血清、志賀氏菌屬診斷血清、大腸艾希氏菌診斷血清、霍亂弧菌診斷血清等。

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